【产品名称】结核分枝杆菌核酸与利福平耐药检测试剂盒（熔解曲线法）

【包装规格】 50人份/盒 

【预期用途】

本试剂盒适合于体外定性检测人痰液样本中的结核分枝杆菌DNA，以及导致结核分枝杆菌利福平耐药的rpoB基因的第507~533位氨基酸密码子区内的纯合突变。

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis），简称结核杆菌（Tubercle bacillus，TB），是引起结核病的病原菌。目前常用的一线抗结核药物有异烟肼、利福平和已胺丁醇等，二线抗结核药物有氟诺喹酮类、阿米卡星和卡那霉素等，研发的新药有利奈唑胺、贝达喹啉和德拉马尼等。但因抗结核药物的不规范使用和结核分枝杆菌自身细胞壁结构等特点，导致结核分枝杆菌对抗结核药物产生耐药性，给结核病的防治带来了严峻的挑战。

利福平是上世纪70年代末期开始在临床中广泛应用于肺结核患者治疗当中，且疗效显著，目前已经成为缩短肺结核患者短程化疗干预的首选药物。利福平主要由rpoB基因突变导致耐药，虽然目前临床新型相关抗结核药物不断问世，肺结核患者的临床疗效也随之不断进步，但抗结核药物仍相对缺乏，且临床上不合理用药现象较为明显，导致不能及时彻底的杀灭肺结核患者体内的结核杆菌，最终引发患者机体不同程度的耐药性、延长疾病病程、增加患者的死亡风险。

本试剂盒适用于结核分枝杆菌感染的辅助诊断，同时针对利福平耐药基因进行检测，有助于了解患者所感染的结核分枝杆菌的耐药性，为临床用药指导提供辅助手段。检测结果仅供临床参考，最终诊断应紧密结合其它临床指标综合考虑。

【检验原理】 

本检测试剂盒采用熔解曲线法结合封闭型含RNA碱基的荧光探针的体外扩增检测技术。针对结核分枝杆菌的特异保守区域设计引物与2条荧光探针，针对利福平耐药的rpoB基因的507~533位氨基酸密码子设计引物与4条特异性的野生型荧光探针，针对内参的特异保守区域设计引物与荧光探针。在PCR扩增过程中，特异性引物与靶序列结合，实现PCR产物形成，并通过RNaseH酶可以切割探针与靶序列结合形成的DNA-RNA杂交链中的RNA碱基，从而使探针被切割，被切割后的探针为一短一长两个片段，荧光基团位于长段上；在熔解曲线形成过程中，切割后形成的长片段探针可与靶序列结合，形成互补片段，并能得出互补片段的Tm值。因为探针均为特异性探针，所以其可特异与靶序列结合形成特异的熔解曲线峰。针对内参与结核分枝杆菌特异保守区域的熔解曲线峰可特异检测内参基因的有无与结核分枝杆菌的有无。针对结核分枝杆菌rpoB基因第507~533位氨基酸的密码子区内无碱基突变时，4条特异性的野生型荧光探针均可与靶标完全匹配结合，每条探针与靶标序列结合形成的互补片段有一个特异的熔解曲线峰；若rpoB基因的第507~533位氨基酸的密码子区有碱基突变，则发生突变位置的探针与靶标不能形成完全匹配的结合，其与靶标序列结合形成的互补片段的熔解曲线峰差值的Tm值与无碱基突变的Tm值之间有差值，甚至可能形不成熔解曲线峰，或者因为突变比例的问题，可能会造成不只有一个熔解曲线峰。

【储存条件及有效期】

本试剂盒储存于−18℃以下，有效期9个月（请于有效期内使用）。开封后，反复融次数不得多于4次，在-18℃以下的避光条件下运输，可稳定保存5天。

生产日期及失效日期见标签。

【适用仪器】

宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统。

【样本要求】

1. 采集：

痰液少者，让患者在晨起后漱口，然后做深呼吸数次，将痰从肺部咳出，收集在干净容器内尽快送检。痰液多者，则先嘱患者轻咳，将潴留在气管内陈旧痰咳出弃去；然后深呼吸数次从肺部深处咳新鲜痰液，立即送检。无痰者，可去医院进行雾化吸入法引痰，然后送检。

2. 样本采集注意事项：样本在采集、保存和转移时避免污染。

样本安全性：所有样本均视为有潜在的感染性，操作时按国家相关标准执行。

3. 存放

待测样本在2−8℃保存不应超过24小时；−18℃以下保存不超过4个月；−70℃以下长期保存。应避免反复冻融。