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[产品名称]黄热病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
[包装规格] 20人份/盒、50人份/盒
[预期用途]
本试剂盒适合于对患者的血清样本中的黄热病毒核酸实现定性检测,为临床上黄热病毒感染的诊断和治疗提供有效的辅助手段。检测结果仅供临床参考,最终诊断应紧密结合其他临床指标综合考虑。
黄热病毒(Togavirus)属虫媒病毒B组,为RNA病毒、呈球形、约20~60纳米。病毒侵入人体后扩散到局部淋巴结,并在其中复制繁殖,数日后进入血循环形成病毒血症,主要累及肝、脾、肾、淋巴结、骨髓、横纹肌等。以后病毒从血中消失,而在脾、骨髓、淋巴结等处仍可检出。病毒的强毒株常主要侵犯肝脏,并引起严重病变。临床特征有发热、剧烈头痛、颜面显著充血、明显相对缓脉、大量黑色呕吐物、大量蛋白尿、黄疸等。黄热病毒感染后,出现临床疾病,其余为隐性感染。潜伏期为7日,轻症可仅表现为发热、头痛、轻度蛋白尿等,而不伴有黄疸和出血,持续数日后即恢复。重症一般可分为感染期、中毒期和恢复期。因此建立简便、特异、快速的黄热病毒病原学诊断方法,在黄热临床诊断中具有重要意义。
[检验原理]
本试剂盒采用Taqman荧光探针法,选择黄热病毒特异性的保守区域作为检测靶基因,设计荧光检测的特异性的引物探针,特异性探针5’标记分别为FAM(黄热病毒)和VIC(内参)荧光基团。提取的RNA经逆转录为cDNA,在PCR扩增过程中,特异性引物和探针分别与各自靶序列结合,当Taq酶遇到结合在靶序列上的探针时,发挥5’端外切酶功能,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步,从而实现对血清样本中的黄热病毒核酸进行定性检测。
[储存条件及有效期]
- 未开封的试剂盒:应在避光、温度不高于30℃下储存,有效期12个月。
- 冻干的核酸反应液复溶后立即进行RT-PCR检测,否则应避光储存于-25℃至-15℃,有效期为1周,避免反复冻融(应限制在2次以内)。
- 冻干的阳性对照复溶后,应储存于-25℃至-15℃,有效期为1周,避免反复冻融(应限制在2次以内)。
- 运输条件: 低于37℃可稳定运输1个月。
- 生产日期、生产批号及失效日期见包装标签。
[适用仪器]
QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR仪、雅睿MA-6000荧光定量PCR仪、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪和伯乐CFX Opus 96实时定量PCR仪。
[样本要求]
- 样本采集: 新鲜血清
血清样本采集:用无菌注射器采集被检者3-5mL静脉血于真空采血管中(最好带分离胶),室温放置不得超过4小时,3000rpm离心10分钟,吸取上层血清(切勿吸入红细胞)转入另一无菌离心管中备用。
- 样本采集注意事项:样本在采集、保存和转移时避免污染。
样本安全性:所有样本均视为有潜在的感染性,操作时按国家相关标准执行。
- 存放
采集的样本应尽快送检,24小时内无法检测的样本则应置于-18℃以下保存,保存时间不超过2个月,-70℃以下长期保存。样本应设立专库或专柜单独保存。
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