甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒（免疫层析法）
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所属分类：呼吸道疾病
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肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌及耐药基因（KPC、NDM、OXA48和IMP）多重检测试剂盒（荧光PCR法）
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产品简介
【产品名称】
肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌及耐药基因（KPC、NDM、OXA48和IMP）多重检测试剂盒（荧光PCR法）
【包装规格】 20人份/盒、50人份/盒
【预期用途】
本试剂盒用于体外定性检测人痰液样本中的肺炎克雷伯菌（ Klebiella pneumonia，KPN）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，Aba）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）及4种碳青霉烯耐药基因，包括KPC、NDM、OXA48和IMP，为疑似细菌感染患者提供临床诊断和用药提供指导的依据。
肺炎克雷伯菌是临床常见的条件致病菌，也是引起院内感染的重要致病菌之一，在机体抵抗力降低时，细菌由呼吸道进入肺内，导致机体多部位感染，及早的使用抗生素是治愈的关键[1]。肺炎克雷伯氏菌对常用抗菌药物（如氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磷霉素类等）耐药，还对被视为“抗生素最后防线”的碳青霉烯类药物耐药，全国平均为10.9%。使其可供选择的治疗药物非常有限（如多粘菌素、替加环素），导致患者致死率较高，严重威胁患者生命健康[2]。
鲍曼不动杆菌感染最常见的部位是肺部，是医院获得性肺炎（hospital acquired pneumonia，HAP）、尤其是呼吸机相关性肺炎（Ventilator associated pneumonia，VAP）重要的致病菌，常伴有其他细菌和真菌感染，具有高致病率、高病死率的特点。鲍曼不动杆菌具有强大的获得耐药性和克隆传播能力，已成为院内感染的最重要的病原菌之一。全国耐药监测网显示鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物的耐药率全国平均为53.7%。
铜绿假单胞菌是临床最常见的非发酵革兰阴性杆菌，是医院获得性感染重要的条件致病菌，具有易定植、易变异和多耐药的特点。下呼吸道是医院内细菌感染最常见的发生部位，感染种类主要包括支气管扩张合并感染、慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)合并感染和肺炎等，由多重耐药PA引起的下呼吸道感染病死率高，治疗困难[3]。而耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌（Carbapenems resistance Pseudomonas aeruginosa CRPA）居高不下，全球细菌耐药监测数据显示，CRPA在HAP致病原中居前几位，同时对常用抗菌药物的耐药率逐年升高，全国平均为18.3%，给临床治疗造成了极大的困扰。
碳青霉烯类抗生素是抗菌谱最广，抗菌活性最强的非典型β-内酰胺抗生素，因其具有对β-内酰胺酶稳定以及毒性低等特点，已经成为治疗严重细菌感染最主要的抗菌药物之一。碳青霉烯类对质粒介导的超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectrumβ-lactamases，ESBLs）、染色体及质粒介导的头孢菌素酶(AmpC酶)均具有高度稳定性。产生耐药的最主要原因是碳青霉烯酶。碳青霉烯类酶根据Ambler分类可分为A、B和D三类，其中A、D类为丝氨酸酶，Ｂ类为金属酶。最常见的A类酶是肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（Klebsiella pneumoniae carbapenemases，KPC)[4]，B类酶是新德里金属酶(New Delhimetalloenzyme，NDM）、亚胺培南(Imipenem，IMP)，D类酶为苯唑西林酶Oxacillinase，OXA）[5]。
本试剂盒为多种常见细菌感染和耐碳青霉烯类药物的诊断提供辅助依据。检测结果仅供临床参考，最终诊断须紧密结合其他临床指标综合分析。
【检验原理】
本试剂盒采用荧光PCR法，针对KPN、Aba和PA及碳青霉烯类耐药基因KPC、NDM、OXA48和IMP的保守性序列设计荧光检测的引物探针，探针5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团。检测扩增过程中，特异性引物和探针分别与各自与靶序列结合，通过Taq酶的DNA聚合酶活性和5’-3’外切酶活性实现PCR产物形成与荧光信号累积完全同步，实现对样本中KPN、Aba、PA和耐药基因KPC、NDM、OXA48和IMP的定性检测。同时引入内源内参质控，标记VIC/HEX荧光基团，避免检测的假阴性。
【储存条件及有效期】
储存条件：本试剂盒应避光储存于-18℃以下，有效期12个月；避免反复冻融（冻融次数不多于4次）；开封后若置于2~8℃保存，请于一周内使用。
运输条件：试剂盒置于含干冰的运输箱中可稳定保存5天。
生产日期、生产批号及失效日期见包装标签。
【适用仪器】
ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7500Fast实时荧光定量PCR系统、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR仪、雅睿MA-6000荧光定量PCR仪、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪和伯乐CFX Opus 96实时定量PCR仪。
【样本要求】
- 样本类型：痰液。
样本采集：用无菌采样管取1~3mL受检者肺深部咳出痰液密闭送检，标本可立即用于测试。
- 注意事项：
样本在采集、保存和转移时避免污染；样本采集前24小时内禁止使用呼吸道外用药（药膏、喷剂、滴剂）；所有样本均视为有潜在的感染性，操作时按国家相关标准执行。
- 样本存放：
待测样本2~8℃保存7天，-18℃以下保存不超过4个月，-70℃以下长期保存。待测冷冻样本提取应当在样本完全融解后震荡混匀，应避免反复冻融。提取后的DNA样本若不用于即时检测，应置于-18℃以下，保存期限不超过3个月，应避免反复冻融。
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