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【产品名称】 人EML4-ALK融合基因突变检测试剂盒(荧光PCR法)
【包装规格】 20人份/盒、50人份/盒
【预期用途】
本检测试剂盒用于体外定性检测人非小细胞肺癌患者样本中EML4-ALK融合基因12种突变型别(表1)。其检测结果仅供临床参考,不应作为患者个体化治疗的唯一依据,临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。
肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤,其中80%~85%的病例为非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)。 棘皮动物微管相关蛋白样4(echinoderm microtubule-associated protein-like 4,EML4)和间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)的基因融合是NSCLC的一个新型靶点,EML4和ALK分别位于人类2号染色体上的P21 和 P23 带,相隔约1270万个碱基对[1]。目前发现的至少有20种融合变体,其中以表1中的12种融合突变体最为常见,其中最常见的是突变体1(E13;A20),其次为突变体3a和3b(E6;A20),分别约占EML4-ALK融合基因NSCLC患者的33%和29%[2]。以克唑替尼为代表的ALK抑制剂是针对ALK基因融合突变开发的小分子靶向药物,通过抑制ALK酪氨酸激酶区域的活性,阻断其下游异常信号通路,从而抑制肿瘤细胞的生长,实现肿瘤的靶向治疗[3]。临床研究表明克唑替尼对 EML4-ALK 融合突变患者的有效率可达 61%以上,而对野生型的患者几乎没有疗效[4] 。因此,检测 EML4-ALK 融合突变情况是指导 Crizotinib 类药物用药的前提和基础。本检测试剂盒用于指导ALK抑制剂类药物的用药,为非小细胞肺癌患者的个体化医疗提供依据。
表1 可检测的突变型
通用 命名 |
EML4拼接外显子 |
ALK拼接外显子 |
Cosmic ID |
通用 命名 |
EML4拼接外显子 |
ALK拼接外显子 |
Cosmic ID |
variant 1 |
13 |
20 |
463 |
Variant 5b |
2 |
20 |
480 |
Variant 2 |
20 |
20 |
465 |
Variant 5' |
18 |
20 |
488 |
Variant 3a |
6 |
20 |
474 |
Variant 6 |
13 |
20 |
1063 |
Variant 3b |
6 |
20 |
493 |
Variant 7 |
14 |
20 |
1065 |
Variant 4 |
14 |
20 |
491 |
Variant 8a |
17 |
20 |
/ |
Variant 5a |
2 |
20 |
480 |
Variant 8b |
17 |
20 |
/ |
【检验原理】
本试剂盒采用荧光探针实时PCR技术,针对EML4-ALK融合基因12种融合突变及内参基因靶序列,设计荧光检测的特异性的引物探针,特异性探针5’标记为FAM荧光基团(12种融合突变)和HEX(VIC)荧光基团(内参),3’标记为BHQ1淬灭基团。提取的RNA经逆转录为cDNA,在PCR扩增过程中,特异性引物和探针分别与各自靶序列结合,当Taq酶遇到结合在靶序列上的探针时,发挥5’端外切酶功能,使报告荧光基团和淬灭基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步,通过两个反应液实现对样本中12种融合突变的定性检测及内参的检测。
同时引入内源内参质控,作为对试剂、RNA质量以及操作本身的质控,即便RNA有降解,通过内参能够真实地反应体系中有效的RNA量。
【储存条件及有效期】
- 未开封的试剂盒:应在避光、温度不高于30℃下储存,有效期12个月。
- 撕开密封袋后,管内的冻干试剂应立即使用。
- 冻干的核酸反应液复溶后立即进行RT-PCR检测,否则应避光储存于-15℃以下,有效期为1周,避免反复冻融(应限制在2次以内)。
- 冻干的阳性对照复溶后,应储存于-15℃以下,有效期为1周,避免反复冻融(应限制在2次以内)。
- 运输条件: 低于37℃可稳定运输1个月。
- 生产日期、生产批号及失效日期见包装标签。
【适用仪器]
ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7500Fast实时荧光定量PCR系统、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR仪、雅睿MA-6000荧光定量PCR仪、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪和伯乐CFX Opus 96实时定量PCR仪。
【样本要求】
- 样本来源:石蜡包埋病理组织或切片样本。
石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞(建议含量在30%以上),所取部分尽量在蜡块中部,石蜡切片数应不少于3张,厚度在5-10 μm。且手术切除的组织应尽快在4-10%的福尔马林中固定,固定时间以8-24 小时为宜;包埋前应进行彻底脱水。建议选择未超过2年的NSCLC石蜡包埋组织样本。
- 样本采集注意事项:样本在采集、保存和转移时避免污染。
样本安全性:所有样本均视为有潜在的感染性,操作时按国家相关标准执行。
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