猴痘病毒抗原检测试剂盒（免疫层析法）
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所属分类：药物基因个性化检测
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产品简介
【产品名称】 人EGFR基因29种突变检测试剂盒（荧光PCR法）
【包装规格】 16人份/盒、32人份/盒
【预期用途】
本检测试剂盒用于体外定性检测人非小细胞肺癌患者样本中的EGFR基因18-21号外显子的常见突变（详见表1）。
肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因，严重威胁人类健康。在肺癌患者中，非小细胞肺癌约占80%。EGFR是目前非小细胞肺癌治疗最重要的分子靶点，EGFR的磷酸化具有促肿瘤细胞生长、分化、侵袭、转移、抗凋亡以及促进肿瘤血管生成等作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）可通过抑制EGFR自身磷酸化而阻断EGFR信号传导通路，从而抑制肿瘤细胞的增殖、分化、促进肿瘤细胞凋亡、减少肿瘤新生血管等，从而实现肿瘤的靶向治疗[1]。大量研究表明，EGFR-TKI的治疗疗效与EGFR基因突变状况密切相关，可特异性抑制具有EGFR基因突变的肿瘤细胞的生长[2~3]。EGFR基因定位于第7号染色体短臂（7p12），全长200Kb，由28个外显子组成，突变区域主要位于18~21号外显子，其中外显子19上的746~753密码子缺失突变约占突变的45%，外显子21上的L858R突变约占40%~45%[4]。在《NCCN非小细胞肺癌诊断治疗指南》明确指明，在进行EGFR-TKI用药前，需进行EGFR基因突变检测。本检测试剂盒用于指导表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）类药物的用药，为非小细胞肺癌患者的个体化医疗提供依据。本试剂盒仅用于对非小细胞肺癌患者EGFR基因常见突变的检测，其检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。
表1 可检测突变型
|
Mutation |
Exon |
Base Change |
Cosmic ID |
Mutation |
Exon |
Base Change |
Cosmic ID |
|
19del |
19 |
2235-2249del15 |
6223 |
19del |
19 |
2239-2247del9 |
6218 |
|
2235-2252>AAT |
13551 |
2239>2253del15 |
6254 |
||||
|
2236-2253del18 |
12728 |
2239-2256del18 |
6255 |
||||
|
2237-2251del15 |
12678 |
2239-2248>C |
12382 |
||||
|
2237-2254del18 |
12367 |
2239-2258>CA |
12387 |
||||
|
2237-2255>T |
12384 |
2240-2251del12 |
6210 |
||||
|
2236-2250del15 |
6225 |
2240-2257del18 |
12370 |
||||
|
2238-2255del18 |
6220 |
2240-2254del15 |
12369 |
||||
|
2238-2248>GC |
12422 |
2239-2251>C |
12383 |
||||
|
2238-2252>GCA |
12419 |
|
|
||||
|
L858R |
21 |
2573T>G |
6224 |
3Ins20 |
20 |
2307-2308insGCCAGCGTG |
12376 |
|
T790M |
20 |
2369C>T |
6240 |
2319-2320insCAC |
12377 |
||
|
G719A |
18 |
2156G>C |
6239 |
2310-2311insGGT |
12378 |
||
|
G719S |
18 |
2155G>A |
6252 |
L861Q |
21 |
2582T>A |
6213 |
|
G719C |
18 |
2155G>T |
6253 |
S768I |
20 |
2303G>A |
6241 |
【检验原理】
本检测试剂盒采用PCR富集液、ARMS（Amplification refractory mutation system）技术与Taqman探针相结合方法检测L858R、19del等EGFR常见突变型。通过对突变位点的PCR富集，进一步提高了检测的分辨率、灵敏度。Taqman探针分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ2。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’的外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。PCR富集液通过酶切作用，降低了野生型背景序列，进一步提高了检测的分辨率、灵敏度。ARMS方法的特点通过无3’-5’外切酶活性的Taq DNA Polymerase，可特异性的识别引物的3’末端，只有引物3’末端完全配对时，才能正常扩增发生突变位点的片段，当引物3’末端发生错配时，不能有效的扩增。因此，采用此种方法可选择性的扩增突变序列，Taqman探针与扩增产物结合，从而鉴定出突变目的序列。
内参反应液选择的检测区域是人EGFR基因外显子2上相对保守的区段，约120bp，作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控，即便DNA有降解，通过内参能够真实地反应体系中基因有效的DNA 量。
检测体系中含有一定比例的dUTP、dNTP和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶-N-糖基化酶或UNG酶）可以打断含有dUTP的PCR产物，从而有效的防止PCR污染。
【储存条件及有效期】
本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下，有效期为9个月（请于有效期内使用）。开封后，反复融次数不得多于4次，在-18℃以下的避光条件下运输，可稳定保存5天。
生产日期及失效日期见标签。
【适用仪器】
ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7300荧光定量PCR仪、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
由于肿瘤的异质性，所采集的临床样品往往会混有正常组织细胞，不同类型样品正常细胞混杂程度不同，而且提取的DNA纯度和质量也因样品类型而改变，尤其是用福尔马林固定的石蜡切片样品，福尔马林会对DNA有交联和降解作用，因此请按下面推荐样品类型顺序收集样品并提取DNA用于检测，客户可根据临床实际样品的情况进行选择。
1、推荐样品类型顺序：新鲜肿瘤组织>冰冻病理切片>石蜡包埋病理组织或切片>血浆或血清。
2、从新鲜病变组织中取样应确定含有肿瘤组织，建议含量在30%以上。
3、石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞（建议含量在30%以上），所取部分尽量在蜡块中部，石蜡切片数应不少于3张，厚度在5-10 μm。且手术切除的组织应尽快在4-10%的福尔马林中固定，固定时间以8-24 小时为宜；包埋前应进行彻底脱水。所用石蜡包埋病理组织或切片样品一般请选择保存尚未超过3年的样品。
4、取患者不少于5 ml 外周血样本于EDTA 抗凝管中。轻微颠倒混匀后，4 小时以内完成血浆分离工作；若将外周血置于分离胶促凝管中（金黄色管盖），轻微颠倒混匀后，静置凝固后离心获得血清。
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