猴痘病毒抗原检测试剂盒（免疫层析法）
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所属分类：药物基因个性化检测
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产品简介
【产品名称】 人K-ras基因8种突变检测试剂盒（荧光PCR法）
【包装规格】 24人份/盒、48人份/盒
【预期用途】
该产品用于体外定性检测人石蜡包埋病理切片组织中提取DNA的K-ras基因12和13密码子8种突变（表1）。
表1 人K-ras基因12号密码子6种突变型、13号密码子2种突变型
|
Mutation |
密码子 |
Base Change |
突变率 |
Mutation |
密码子 |
Base Change |
突变率 |
|
Gly12Ala |
12 |
GGT>GCT |
1.12% |
Gly12Ser |
12 |
GGT>AGT |
0.94% |
|
Gly12Asp |
12 |
GGT>GAT |
7.02% |
Gly12Val |
12 |
GGT>GTT |
4.75% |
|
Gly12Arg |
12 |
GGT>CGT |
0.67% |
Gly13Asp |
13 |
GGC>GAC |
2.53% |
|
Gly12Cys |
12 |
GGT>TGT |
2.33% |
Gly13Cys |
13 |
GGC>TGC |
0.17% |
突变率统计来源于Sanger数据库（http://cancer.sanger.ac.uk/cosmic）
人类有17%~25%肿瘤带有突变的K-ras基因，其在肺癌患者中的突变率为15%~30%，在结直肠癌患者中的突变率为20%~50%(数据来源于Sanger数据库)。因为K-ras基因编码的P21蛋白位于EGFR信号通路下游，K-ras基因突变后，下游信号通路始终处于激活状态，不受上游靶向药物对EGFR的影响，导致细胞持续恶性增殖。K-ras 基因突变一般会使肺癌患者对 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂产生耐药，使结直肠癌患者对抗 EGFR 抗体类药物产生耐药[1, 2, 3]。2008年美国国立综合癌症网络（NCCN）发布的结直肠癌临床实践指南指出导致K-ras处于激活状态的突变部位主要是位于外显子2的密码子12和13，并推荐所有晚期转移结直肠癌患者在用药前进行K-ras突变检测[4]。因此快速、准确的检测出K-ras基因突变在临床用药指导方面具有重要意义。本试剂盒以 DNA 为检测样本，提供突变状态的定性评估，可辅助临床医生筛选出受益于靶向药物的结直肠癌、肺癌等肿瘤患者。试剂盒检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。
【检验原理】
本检测试剂盒采用针对野生型序列的特异阻断技术与Taqman探针相结合方法检测位于人12号染色体K-ras 基因2号外显子的8种热点突变。Taqman探针分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ2。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’的外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。K-ras检测反应液中含有的阻断成分，通过特定的 PCR 反应程序，可特异性阻断野生型扩增，突变型扩增不受影响，Taqman探针与突变型扩增产物结合，在实时 PCR 平台上实现对样品 DNA 中突变的检测。
检测体系中含有一定比例的dUTP、dNTP和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶-N-糖基化酶或UNG酶）可以打断含有dUTP的PCR产物，从而有效的防止PCR污染。
内参反应液选择的检测区域是人K-ras基因相对保守的区段，约150bp，作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控，即便DNA有降解，通过内参能够真实地反应体系中基因有效的DNA 量。
【储存条件及有效期】
- 未开封的试剂盒：应在避光、温度不高于30℃下储存，有效期12个月。
- 撕开密封袋后，管内的冻干试剂应立即使用。
- 冻干的核酸反应液复溶后立即进行RT-PCR检测，否则应避光储存于-15℃以下，有效期为1周，避免反复冻融（应限制在2次以内）。
- 冻干的阳性对照复溶后，应储存于-15℃以下，有效期为1周，避免反复冻融（应限制在2次以内）。
- 运输条件: 低于37℃可稳定运输1个月。
- 生产日期、生产批号及失效日期见包装标签。
【适用仪器】
ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7300荧光定量PCR仪、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞，所取部分尽量在蜡块中部，石蜡切片数应不少于3张，厚度在5~10μm。且手术切除的组织应尽快在4~10%的福尔马林中固定，固定时间以8~24 小时为宜；包埋前应进行彻底脱水。所用石蜡包埋病理组织或切片样品一般请选择保存尚未超过3年的样品。
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