猴痘病毒抗原检测试剂盒（免疫层析法）
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所属分类：药物基因个性化检测
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产品简介
【产品名称】 人BRAF基因V600E突变检测试剂盒（荧光PCR法）
【包装规格】 24人份/盒、48人份/盒
【预期用途】
本检测试剂盒用于体外定性检测人类黑色素瘤、大肠癌、甲状腺癌和肺癌石蜡包埋组织样本中BRAF基因V600E突变。
BRAF基因编码的蛋白质是存在于细胞质内的丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK通路中重要的信号调节因子，参与调控细胞内多种生物学活动，如细胞生长、分化和凋亡等[1]。已发现有超过30种BRAF突变类型，其中约有90%的突变位于第15外显子，其中V600E突变被认为是最常见的突变，即第15外显子中第1799位核苷酸胸腺嘧啶(T)突变为腺嘌呤(A)，导致蛋白质产物中第600位的缬氨酸(V)被谷氨酸(E)替代[2-3]。这种V600E突变导致BRAF的激酶活性增加，从而持续激活下游MAPK信号通路，引起肿瘤细胞的过度增殖和恶性转化。
BRAF突变常见于黑色素瘤、结直肠癌、甲状腺癌及肺癌等恶性肿瘤中。研究认为BRAF基因突变与EGFR、KRAS等突变相互独立、相互排斥且不同时出现[4] 。美国国立综合癌症网络(NCCN)《结直肠癌临床实践指南》(V3.2011)建议，转移性结直肠癌患者在使用EGFR抑制剂-爱必妥或帕尼单抗等靶向药物治疗时，应该进行肿瘤组织KRAS基因突变检测，如果KRAS无突变，应该考虑检测BRAF基因状态，患者存在V600E突变时，对EGFR单抗药物是无效的。因此了解BRAF基因的突变情况，成为临床靶向药物治疗中筛选EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)和BRAF基因突变靶向药物受益患者的需要。
本试剂盒仅用于对BRAF基因V600E（即1799T>A）体细胞突变进行检测。，其检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。
【检验原理】
本检测试剂盒采用PCR富集液、ARMS（Amplification refractory mutation system）技术与Taqman探针相结合方法检测BRAF基因V600E突变。Taqman探针分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ1。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’的外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。PCR富集液通过酶切作用，降低了野生型背景序列，进一步提高了检测的分辨率、灵敏度。ARMS方法的特点通过无3’-5’外切酶活性的Taq DNA Polymerase，可特异性的识别引物的3’末端，只有引物3’末端完全配对时，才能正常扩增发生突变位点的片段，当引物3’末端发生错配时，不能有效的扩增。因此，采用此种方法可选择性的扩增突变序列，Taqman探针与扩增产物结合，从而鉴定出突变目的序列。
内参反应液作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控，即便DNA有降解，通过内参能够真实地反应体系中基因有效的DNA 量。
检测体系中含有一定比例的dUTP、dNTP和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶-N-糖基化酶或UNG酶）可以打断含有dUTP的PCR产物，从而有效的防止PCR污染。
【储存条件及有效期】
本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下，有效期为9个月（请于有效期内使用）。开封后，反复融次数不得多于4次，在-18℃以下的避光条件下运输，可稳定保存5天。
生产日期及失效日期见标签。
【适用仪器】
ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7300荧光定量PCR仪、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞，所取部分尽量在蜡块中部，石蜡切片数应不少于3张，厚度在5~10μm。且手术切除的组织应尽快在4~10%的福尔马林中固定，固定时间以8~24 小时为宜；包埋前应进行彻底脱水。所用石蜡包埋病理组织或切片样品一般请选择保存尚未超过3年的样品。
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